بررسی تکثیر ژن های vh و vl از منبع RNA تک پلاسماسل انسانی

مجله پلاسما و نشانگرهای زیستی

مقاله 1، دوره 7، شماره 4 - شماره پیاپی 27، آذر و دی 1393   

نویسندگان

لعیا عصمتی؛ جلیل فلاح مهرآبادی؛ حمیده روحانی نژاد؛ معصومه بزاز

پژوهشکدة علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران

چکیده

مقدمه وهدف:نخستین نسل آنتی­بادی­های درمانی منوکلونال با منشا موشی موجب بر­انگیختن پاسخ ایمونولوژیکی در بدن انسان می­شود. استفاده از آنتی­بادی درمانی کاملاً انسانی علاوه بر کاهش ایمونوژنیسیته، بیشترین کارایی را به دنبال خواهد داشت. امروزه جهت تهیه آنتی­بادی انسانی تکنیک های‌ نمایش فاژی و روش‌های مبتنی بر تک سلولB، مورد توجه قرار گرفته است. هدف از این پژوهش تکثیر ژن­های VHو VLاز منبع RNAپلاسماسل انسانی می باشد.روش کار:از واکنش RT-PCRبه منظور جداسازی و تکثیر قطعات ژن VHو VLاز تک پلاسماسل غربالگری شده علیه آنتیژن مورد نظر استفاده شد. در ابتدا با استفاده از بافر لیز­کننده­ی سلول، پلاسماسل­ها لیز و جهت ساخت cDNAاستفاده گردیدند. ژن­های آنتی­بادی انسانی با استفاده از cDNAحاصل از یک پلاسماسل و مجموعه­ پرایمر­های آنتی­بادی تکثیر وشش جفت پرایمر جهت تکثیر نواحی متغیر زنجیره سنگین (VH) و سبک (VL) مورد استفاده قرار گرفتند. در این پرایمر­ها جایگاه برش آنزیم­های محدودالاثر جهت کلون نمودن در وکتور مربوطه و توالی لینکر جهت اتصال نواحی VHو VLقرار داده شد. یافته­ها:الکتروفورزطی واکنشPCRمشخص نموده کهقطعات VHو VLبه طول حدود bp400 به طور جداگانه تکثیر یافته­اند. توالی­های به­دست آمده از ژن­های آنتی­بادی با سایر توالی­های موجود در پایگاه NCBIمشابهت 97 درصدی نشان داد.نتیجه­گیری:پرایمرهای مورد استفاده در این پژوهش به گونهای طراحی شدند که دارای توالی لینکر جهت تهیه ScFvو جایگاه برش آنزیم­های NcoIو NotIجهت کلونینگ قطعات VHو VLهستند.

کلیدواژه‌ها

آنتی­ بادی مونوکلونال انسانی؛ ScFv؛ پلاسماسل