غربال­ گری آنتی­ بادی انسانی بر علیه توکسین کزاز با روش نمایش فاژی

مجله پلاسما و نشانگرهای زیستی

مقاله 3، دوره 9، شماره 1 - شماره پیاپی 32، فروردین 1394، صفحه 17-26   

نویسندگان

حمیده روحانی نژاد¹؛ جلیل فلاح مهرآبادی²؛ معصومه بزاز³

¹پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران. ایران.

²گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه قم، قم. ایران

³پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران. ایران

چکیده

مقدمه و هدف:توکسین کزاز یکی از سمی­ترین موادی است که بر روی سیستم اعصاب مرکزی تاثیر دارد و باعث انقباض شدید عضلات می­شود. بنابراین، تشخیص سریع و درمان نوروتوکسین­های تتانوس ضروری به نظر می­رسد. امروزه آنتی‌بادی‌ها‌ در حوزه‌های تشخیص و درمان جایگاه ویژه‌ای را به خود اختصاص داده‌اند. در این‌میان، آنتی‌بادی‌های منوکلونال کاملاً انسانی به دلیل عدم برانگیختن پاسخ ایمنی در بدن و کارایی بالا در درمان بیماری‌ها مورد توجه قرار‌گرفته شده است. بلوغ تمایلی آنتی­بادی­ها کاربرد آن­ها را در پزشکی و پروژه­های تحقیقاتی تسهیل نموده است.در این مطالعه، هدف ما غربال­گری آنتی­ بادی کزاز با استفاده از روش نمایش فاژی و یافتن کاربرد قطعات آنتی­ بادی جدا شده از کتابخانه ایمن در ابزار تشخیصی و درمانی می­باشد.روش کار:در تحقیق پیش‌رو، به­ وسیله­ ی روش نمایش ­فاژی غنی­ سازی و غربال­ گری آنتی‌بادی منوکلونال نوترکیب انسانی از یک فرد واکسینه با توکسوئید کزاز انجام گرفته شد.کتابخانه با وکتور بیانیpSEX81 ساخته و برای غربال­گری در این کتابخانه، غنی­ سازی با استفاده از روش نمایش فاژی انجام شد.یافته ها:فاژ کمکیM13K07 با تیتر pfu/ml1013آماده و توکسین تتانوس در میکروپلیتپوشش داده شد. روندغنی­ سازی با استفاده از ذرات فاژ انجام و دقت فرآیند غنی­ سازی توسط فاژELISA تایید گردید. تنها کلون با جذب نوری بالا از چرخه غنی­ سازی جدا شد. برای جداسازی آنتی­ بادی های کزاز، ابتدا استخراج وکتور از کتابخانه انجام شد.پس از آن، پنج مرحله غنی­ سازی صورت گرفت.قوی­ترین غنی­ سازی در چرخه چهارم رخ داد و وجود آنتی­ بادی کزاز را تایید نمود. در مجموع50 تک کلنی به صورت تصادفی از این چرخه انتخاب و 20 کلون با اتصال قوی انتخاب و توالی­ یابی شدند.نتیجه گیری:در این مطالعه، هدف ما غربال­ گری آنتی­ بادی کزاز با استفاده از روش نمایش فاژی و یافتن کاربرد قطعات آنتی­ بادی جدا شده از کتابخانه ایمن در ابزار تشخیصی و درمانی می­باشد.

کلیدواژه‌ها

کزاز؛ غنی­ سازی؛ نمایش فاژی