تعداد نشریات | 418 |
تعداد شمارهها | 10,005 |
تعداد مقالات | 83,629 |
تعداد مشاهده مقاله | 78,550,549 |
تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 55,699,476 |
اولین گزارش از وقوع سوختگی جوانه و سرشاخه درختان گلابی با عامل Phoma glomerata در ایران | ||
گیاهپزشکی کاربردی | ||
دوره 8، شماره 1 - شماره پیاپی 25، شهریور 1398، صفحه 61-62 اصل مقاله (361.65 K) | ||
نویسندگان | ||
پرسا تیموری* 1؛ سید وحید علوی2 | ||
1دانشجوی دکترای بیماری شناسی گیاهی، گروه گیاهپزشکی دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان | ||
2دانشیار، بخش تحقیقات گیاهپزشکی، مرکز تحقیقات و آموزش کشاورزی و منابع طبیعی مازندران، ساری، ایران | ||
چکیده | ||
طی بازدیدهای انجام شده طی نیمه پایانی زمستان 1397 تا ابتدای بهار 1398 از باغات گلابی در استان مازندران، نشانههایی مشابه سوختگی در سرشاخهها و جوانههای جانبی مشاهده شد. به منظور بررسی و شناسایی عامل بیماری، نمونههای دارای علائم به آزمایشگاه منتقل گردید و پس از ضدعفونی سطحی توسط الکل اتانول 70% و محلول هیپوکلریت سدیم 5/0 درصد در تشتکهای پتری حاوی محیط کشت آب آگار (WA) و سیبزمینی دکستروز آگار (PDA) همراه با 5/1 درصد آنتیبیوتیک تتراسایکلین و استرپتومایسین کشت داده شد و در دمای 25 درجه سلسیوس نگهداری گردید. پرگنه قارچ، ابتدا به رنگ کرم تا قهوهای روشن و سپس به رنگ سبز تیره تغییر رنگ یافت و پس از پنج روز پیکنیدیومهای قارچ در محیط کشت ظاهر شدند. در نهایت خالصسازی جدایههای قارچی به روش نوک ریسه و تک اسپـور انجام و جدایههای خالص درتشتکهای حاوی محیط کشت PDA کشت داده شد. پیکنیدها تیره رنگ و تقریباً صاف با گردن نسبتاً بلند بوده و کنیدیهای آن اغلب تک سلولی و تقریباً تخممرغی شکل تا بیضوی و شفاف اما در توده اسپور تیره رنگ بودند. کلامیدوسپورهای آن نامنظم و در زنجیرههای منشعب و غیرمنشعب به صورت میانی و انتهایی تشکیل شدند. بر اساس خصوصیات ماکروسکوپی و میکروسکوپی قارچ در محیط کشت و طبق توصیف ارائه شده توسط منابع معتبر علمی (Boerema et al., 2004)، گونه Phoma glomerata شناسایی شد. آزمونهای بیماریزایی بر روی ده نهال سالم یک ساله و شاخههای فاقد بیماری انجام شد. سوسپانسیون حاوی اسپورهای ثانوی با غلظت (106 × 1 اسپور در میکرولیتر) روی آنها پاشیده شد. گیاهان شاهد تنها با آب مقطر سترون آغشته شدند و پس از قرار دادن در محفظه پلاستیکی در دو دامنه دمایی 2 ±15 و 2± 23 درجه سلسیوس و رطوبت نسبی 90%، در گلخانه نگهداری شدند. پس از ده روز علایم بیماری شامل لکههای زرد با حاشیه سوخته مشاهده شد که با علایم ارائه شده در منابع (Chuan and Chand, 1980) مطابقت داشت. گیاهان شاهد فاقد علائم مزبور بودند. به منظور تهیه توده میسلیومی جهت استخراج DNA ژنومی، از محیط غذایی PDB (Potato dextrose broth) استفاده شد. استخراج DNA به روش CTAB انجام گردید (Doyle and Doyle, 1987؛ امیردهی و همکاران، 1396). نواحی ژنومی ITS1-5.8S-ITS2 تکثیر و تعیین توالی شدند. جهت تکثیر این نواحی از ترکیب آغازگر ITS1 با توالی )'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'5) به عنوان آغازگر مستقیم و آغازگر ITS4 به عنوان آغازگر معکوس با توالی ('-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'5) استفاده شد (White and Morgan, 1987؛ White et al., 1990). مخلوط واکنش PCR با حجم نهایی 25 میکرولیتر شامل 5/6 میکرولـیتر آب دیونـیزه استریل، 5/13 میـکرولیتر 2X PCR Master Mix ، 5/0 میکرولیتر از هـر آغازگر به غلـظت نهـایی 10 پیکـومول و 4 میکرولیتر DNA طـی واکنش زنجیرهای پلیمراز شامل واسرشتسازی اولیه در دمای 94 درجه سلسیوس به مدت دو دقیقه و سپس 38 چرخه تحت 1- دانشجوی دکتری، گروه بیماریشناسی گیاهی، دانشگاه کشاورزی و منابع طبیعی گرگان، گرگان، ایران 2- دانشیار، بخش تحقیقات گیاهپزشکی، مرکز تحقیقات و آموزش کشاورزی و منابع طبیعی مازندران، ساری، ایران نویسنده مسئول مکاتبات: p_teymuri@yahoo.com شرایط واسرشتسازی در 94 درجه سلسیوس به مدت 30 ثانیه، اتصال در دمای 50 درجه سلسیوس 30 ثانیه، گسترش در دمای 72 درجه سلسیوس 30 ثانیه و گسترش نهایی در دمای 72 درجه سلسیوس به مدت 10 دقیقه در دستگاه ترمـوسایکـلر قرار گرفـت و سپـس محصـول نهـایـی از طـریـق الکتـروفورز در ژل آگـارز 2/1 درصـد ارزیـابی شـد (White et al., 1990). پس از تعیین توالی و همردیفسازی با توالیهای موجود در بانک ژن GenBank (NCBI) توسط نرمافزار BLAST مقایسه و شباهت جدایههای مورد نظر با قارچ Phoma glomerata (Corda) Wollenw & Hochapfel در سطح 99 درصد مشخص گردید. قارچ Phoma glomerataاولین بار از کشور هند به عنوان عامل بیماری در فیکوس گزارش گردید Mathur, 1979)). همچنین این قارچ با علائم سرخشکیدگی و سوختگی جوانههای جانبی گلابی نیز برای اولین بار از هند گزارش شد (Chuan and Chand, 1980). در ایران نیز وجود این قارچ اولین بار بر روی گندم (صفایی و همکاران، 1379) گزارش گردید و پس از آن بر روی کدوئیان (حاتمی و همکاران، 1387)، فیکوس (آقاپور و همکاران، 1388)، نارنگی (رستمی و همکاران، 1392)، رزماری (Moshrefi Zarandi et al., 2015) در مناطق مختلف ایران گزارش شد. بنابراین این قارچ تاکنون در ایران بر روی درختان گلابی گزارش نشده است و این اولین گزارش از وقوع سوختگی جوانه و سرشاخه با عامل قارچی Phoma glomerataروی درختان گلابی (Pyrus communis) در ایران است. | ||
کلیدواژهها | ||
توالی نواحی ITS؛ سوختگی سرشاخه؛ Pyrus communis؛ Phoma glomerata | ||
مراجع | ||
| ||
آمار تعداد مشاهده مقاله: 254 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 110 |