انتقالcDNA گیرنده فعال کننده پراکسیزومی نوع گاما 1 موشی به داخل سلولهای فیبروبلاست گاوی و بررسی بیان درون سلولی آن به کمک پروتئین گزارشگر فلورسنت سبز

پژوهش های بالینی و آزمایشگاهی دامپزشکی

دوره 3، شماره 6، فروردین 1388، صفحه 1-6   

نوع مقاله: مقاله پژوهشی

چکیده

هدف از این پژوهش، بررسی جایگیری cDNA  PPARγ1موش در پلاسمید بیانی pEGFP-C1 در هسته سلول مورد مطالعه ( فیبروبلاست گاوی) با استفاده از رد یابی مارکر فلورسنتی سبز EGFP می باشد. برای بررسی الگوی بیان و جهت گیری cDNA PPARγ1 درون هسته سلول‌های فیبروبلاست گاوی، پس از تکثیر و کلون نمودن آن در پلاسمید بیانی مناسب pEGFP-C1 سلول‌ها با µg 2.4 پلاسمید و  µl 6 Lipofectamine 2000 ترانسفکت شدند. مارکر EGFP که به صورت فیوز شده باcDNA  PPARγ1بیان می‌شود، برای رد یابی استفاده شد. با ترانسفکت نمودن سلول‌های فیبروبلاست گاوی، پروتئین حاصله عمدتا وارد هسته ها گردید. همان طور که انتظار می رفت، cDNA  ژن PPARγ1 موشی کلون گردیده متصل به ژن گزارشگر فلورسنت سبز با موفقیت بیان شده و پروتئین حاصله عمدتا به داخل هسته سلول‌های مورد مطالعه، وارد شده است. بنابراین می‌توان از پلاسمید نوترکیب حاصله برای مطالعات بیشتر جهت بررسی وظیفه  ژن PPARγ1 بهره برد و اتصال EGFP  به PPARγ1 مانع از جهت یابی داخل سلولی PPARγ1 نمی شود.

کلیدواژه‌ها

فیبروبلاست؛ کلونینگ؛ ترانسفکشن

مراجع

1-       Akiyama, T.E., Baumann, C.T., Sakai, S., Hager, G.L., Gonzalez, F.J. (2002): Selective intranuclear redistribution of PPAR isoforms by RXRα. Molecular Endocrinology. 16, 707–721.

2-       Berger, J., Patel, H.V., Woods, J., Hayes, N.S., Parent, S.A., Clemas, J., Leibowitz, M.D., Elbrecht, A., Rachubinski, R.A., Capone, J.P., Moller, D.E. (2000): A PPARγ mutant serves as a dominant negative inhibitor of PPAR signaling and is localized in the nucleus. Molecular Cell Endocrinology. 162, 7–67.

3-       Bishop-Bailey, D., Hla, T. (1999): Endothelial cell apoptosis induced by the peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) ligand 15-deoxy-Δ12, 14-prostaglandin J2. Journal of Biological Chemistry. 274, 17042–17048.

4-       Copeland, N., Jenkins, N., and Court, D. (2001): Recombineering: a powerful new tool for mouse functional genomics. Nature Review Genetics 2, 769–779.

5-       Fajas, L., Auboeuf, D., Raspe, E., Schoonjans, K., Lefebvre, A., Saladin, R., Najib, J., Laville, M., Fruchart, J., Deeb, S., Vidal-Puig, A., Flier, J., Briggs, M., Staels, B., Vidal, H. and Auwerx, J. (1997): The organization, promoter analysis, and expression of the human PPARg gene. Journal of Biological Chemistry. 272, 18779-18789.

6-       Feige, JN., Gelman, L., Michalik, L., Desvergene, B., Wahli, W. (2006): From molecular action to physiological outputs: peroxisome proliferator-activated receptors are nuclear receptors at the crossroads of key cellular functions. Progress in lipid Research. 45:120-135.

7-       Ghasemi, S., Ghaedi, K.,   Nasr-Esfahani, M.H., Esmaeili, A., Tanhaie, S., Rabeei, F., Karbalaii, K., and Baharvand, H. (2009): Cloning of mouse

 

PPARγ1 cDNA in pEGFP-C1 expression vector. University of Isfahan Biology Journal. Submitted.

8-       Mangelsdorf, DJ, T., Beato, M., Herrlich, P., Schutz G., Umesono, K., Blumberg, B., Kastner, P., Mark, E., Chambon, P., Evans, RM. (1995): The nuclear receptor superfamily: the second decade. Cell. 83:835-839.

9-       Tontonoz, P., Nagy, L., Alvarez, J.G., Thomazy, V.A., Evans, R.M. (1998): PPARγ promotes monocyte/macrophage differentiation and uptake of oxidized LDL. Cell. 93, 241–252.

10-   Vidal-Puig, A., Considine, R., Jimenez-Linan, M., Werman, A., Pories, W., Caro, J. and Flier, J. (1997): Peroxisome proliferator–activated receptor gene expression in human tissues. The Journal of clinical investigation. 99, 2416-2422.

11-   Wada, K., Nakajima, A., Katayama, K., Kudo, C., Shibuya, A., Kubota, N., Terauchi, Y., Tachibana, M., Miyoshi, H., Kamisaki, Y., Mayumi, T., Kadowaki, T. and Blumberg, R. (2006): Peroxisome proliferator-activated receptor γ-mediated regulation of neural stem cell proliferation and differentiation. Journal of Biological Chemistry. 281, 12673-12681.

12-   Woodsa, J.W., Tanenb, M., Figueroac, D.J., Biswasb, C., Zycbanda, E.,  Mollerb, D.E.,  Austinc, C.P.,  Berger, J.P. (2003): Localization of PPARγ in murine central nervous system: expression in oligodendrocytes and neurons. Brain Research. 975, 10–21.

13-   Zhu, Y., Alvares, K., Huang, Q., Rao, M. and Reddy, J. (1993): Cloning of a new member of the peroxisome proliferator-activated receptor gene family from mouse liver. Journal of Biological Chemistry. 268, 26817-26820.