تشخیص سریع بیماری مارک در ماکیان با استفاده از PCR

پژوهش های بالینی و آزمایشگاهی دامپزشکی

دوره 3، شماره 9، دی 1388، صفحه 15-24   

نوع مقاله: مقاله پژوهشی

چکیده

هدف از انجام این مطالعه، بررسی کارآئی یک روش سریع PCR جهت تشخیص طیور آلوده به بیماری مارک که قبلاً مثبت بودن آلودگی آنها با استفاده از بررسی های هیستوپاتولوژیک محرز شده، میباشد که مبنای این تکنیک بر اساس  شناسائی یک قسمت از ژنوم ویروس بنام قطعات ژنی تیامیدین کیناز، از باز 597 تا 807 را که توانائی شناسائی مستقیم MDV در سلولهای کلیه و سایر بافتهای ماکیان آلوده به این ویروس را ممکن میسازد، استوار است. طی این مطالعه 12687 قطعه طیور گوشتی کشتار شده در کشتارگاه صنعتی طیور ارومیه مورد بررسی کالبدگشائی قرار گرفتند. پس از بررسی لاشه های  طیور در 8 مورد از آنها ضایعات بیماری مارک، شامل ندولهای مشخص لنفوئیدی جلدی و احشائی ناشی از لنفوپرولیفراسیون بیماری مارک مشاهده گردید که جهت مطالعات میکروسکوپیک ضایعات، از این تعداد نمونه برداری به عمل آمد. پس از تهیه اسلاید و رنگ آمیزی هماتوکسیلین -ائوزین، نمونه های مثبت بدست آمده از لاشه های مبتلا به بیماری مارک، جهت بررسی با PCR با روش بررسی ژن تیامیدین کیناز مورد استفاده قرار گرفتند. در این مطالعه نمونه هائی از سلولهای بورس فابریسیوس، پر و کلیه طیور مشکوک استفاده گردید. این روش دارای سرعت بسیار بالائی بوده و برای این تکنیک نیم ساعت برای تهیه نمونه، 3 ساعت جهت انجام PCR و 1 ساعت برای الکتروفورز زمان صرف شد. پس از بررسی از 8 نمونه PCR شده، تعداد 7 نمونه مثبت و یک نمونه به همراه نمونه شاهد منفی شناسائی گردید. نتایج بدست آمده نشان میدهند که از آزمایشهای هیستوپاتولوژیک و PCR با یکدیگر همخوانی کامل داشته اند .

کلیدواژه‌ها

بیماری مارک؛ PCR؛ هیستوپاتولوژی؛ تیامیدین کیناز؛ لنفوپرولیفراسیون

مراجع

1-      استیل، جیمز اچ(1376)بیماریهای قابل انتقال بین انسان و حیوان (4)، (ترجمه اسماعیل ذوقی) صفحه 698 (انتشارات مؤسسه تحقیقات و سرم سازی رازی).

2-      سهرابی حقدوست، ایرج(1370) سرطانزائی و سرطان شناسی دامپزشکی، صفحه38(انتشارات دانشگاه تهران).

 

3-      Alexandra C., Jane B. & Pius Kaba A. (1998): Asymptomatic Shedding of Herpes Simplex Virus 1 and 2: implications for prevention of transmission. Department of Internal Medicine, University of New Mexico, Albuquerque. J. Infect. Dis., Oct 15; 198(8):1098-100.

4-      Biggs P.M. (1967): Marek's disease.  Vet.  Rec., 81: 583-592.

5-      Bulow V.V. & Biggs P.M. (1975). Precipitating Antigens associated with Marek's disease viruses & a herpesvirus of turkey. Avian Pathol. , 4: 147-162.

6-      Calnek B.W., Adldinger H.K. & Kahn D.E. (1970): Feather Follicle Epithelium: A source of enveloped & infectious cell-free herpesvirus from Marek's disease. Avian Dis., 14: 219-233.

7-      Caron E, Wyplosz B. & Hall A. (1998): Identification of two distinct mechanisms of phagocytosis controlled by different Rho GTPase. Science 1998; 282: 1717– 1721.

8-      Davidson I., A. Borowskaya, S. Pearl & Malkinson M.(1995): Use of polymerase chain reaction for the diagnosis of natural infection of chickens & turkeys with marek's disease virus & reticuloendotheliosis. Avian Pathol. , 24: 69-94.

9-      Hennig H., Osterrieder N., Muller-Steinhardt M., Teichert H.-M., Kirchner H. & Wandinger K.P. (2003): Detection of Marek's disease virus DNA in Chicken but not in human plasma. J. Clin. Microbiol. , June 2003 pp: 2428-2432.

10-  Kalyani I.H. (2006):Detection and differentiation of Marek's disease virus serotype by PCR and characterization by DNA sequencing of PCR product. PhD thesis, collage of veterinary science and animal husbandry, Anand Agric. Univ., Gujarat, India.

11-  Melnick M.B., Noll E. & Perrimon N. (1993):The Drosophila stubarista phenotype is associated with a dosage effect of the putative ribosome-associated protein D-p40 on spineless. Genetics. 135(2): 553--564.

 

 

12-  Purchase H.G. (1985): Clinical disease and its economic impact .In L.N. Payne (Ed.). Marek's disease. pp: 17-24. Martinus Nijhoff, Boston.

13-  Richard L.W. & Schat K.A. (2003): Marek's disease.In Y.M. Saif (Ed.). Disease of poultry, 11th Ed., pp. 407-465, Iowa state press, Iowa USA.

14-  Wang R.F., Beasley J.N., Wei W.W., Slavik M.F., Johnson M.C.,Wang R. F. & Wei W.C.(1993): Development of PCR method specific for marek's disease virus. Mol. & cell.  Probes, 7:  127-131.