شناسایی باکتریهای همزیست غالب دستگاه گوارش بید غلات (Sitotroga cerealella)

فصلنامه تخصصی تحقیقات حشره شناسی

دوره 13، شماره 4 - شماره پیاپی 52، اسفند 1400، صفحه 257-269   

نوع مقاله: علمی پژوهشی

نویسندگان

راحله مرادی¹؛ مجید کزازی^{* 2}؛ غلام خداکرمیان³؛ عزت ا.... صداقت فر⁴

¹کارشناس ارشد رشته حشره شناسی دانشگاه بوعلی سینا همدان

²عضو هیات علمی گروه حشره شناسی دانشگاه بوعلی سینا همدان

³عضو هیات علمی گروه بیماری شناسی گیاهی دانشگاه بوعلی سینا همدان

⁴عضو هیات علمی گروه بیماری شناسی گیاهی دانشگاه آزاد اسلامی واحد اراک

چکیده

در این پژوهش، باکتریهای همزیست دستگاه گوارش بید غلات شناسایی شد.برای پرورش بید غلات از جو با درصد پروتئین بالا استفاده شد ظرف حاوی جو بعد از آلوده سازی در اطاقک رشد در شرایط دمایی 24 درجه سلسیوس ورطوبت نسبی 65 درصـد نگهـداری شـدند. جهت جدا نمودن باکتری دستگاه گوارش بید غلات از بین جمعیت پرورش داده شده 10 لارو سالم انتخاب شد. دستگاه گوارش لاروها پس از ضد عفونی در اتانول 70 درصد، هیپوکلریت سدیم 5درصد و آب مقطر خارج شد سپس جهت همگن نمودن دستگاه گوارش از یک میلی‌لیتر بافر فسفات 0.1مولار با 7pH= استفاده شد.محتویات همگن‌ شده در محیط کشت نوترینت آگار کشت داده شدبرای انجام واکنش های زنجیره‌ای پلیمراز از5 میکرو لیتر Master Mix ، 2 میکرولیتر DNA استخراج شده ، 1.5 میکرولیتر پرایمر RP2 و 1.5 میکرو لیتر پرایمر FD1 و 15 میکرولیتر Distilled Water که حجم کلی این مواد باید به 25 میکرو لیتر برسد. فرآیند PCR با استفاده از پرایمر‌های عمومی FD1 و RP2 و توالی ژن 16srRNA در دستگاه ترموسایکلرانجام شد. توالی یابی با همکاری شرکت Bioneer انجام شد.ویژگیهای فنوتیپی باکتریهای جدا شده با روشهای استاندارد باکتری‌شناسی مشخص شد. بعد از بررسی تمام کلونی های تهیه شده و مقایسه نتایج بدست آمده بیشترین فراوانی از نظر تعداد کلنی مختص به باکتری mundtii Enterococcus بود و باکتری Enterobacter hormaechei از فراوانی کمتری در دستگاه گوارش بید برخوردار بود. همچنین با توجه به الکتروفورز انجام شده بالاترین باندهای مشاهده شده مربوط به باکتری hormaechei Enterobacter و کوتاهترین باند متعلق به mundtii Enterococcus میباشد.

کلیدواژه‌ها

باکتری های همزیست؛ بید غلات؛ Enterobacter hormaechei؛ Enterococcus mundtii

مراجع