کلون کردن و بیان ژن H ویروس PPR در سیستم بیانی باکولو ویروس

فصلنامه علمی پژوهشی دنیای میکروب ها

مقاله 2، دوره 15، شماره3(پیاپی52)، آذر 1401، صفحه 183-191   

نوع مقاله: مقاله پژوهشی

شناسه دیجیتال (DOI): 10.30495/jmw.2022.1934002.1985

نویسندگان

مهدی طاهری اصل¹؛ مجید مقبلی^{* 2}؛ محمد کارگر³؛ محسن لطفی⁴؛ فرشید کفیل زاده³

¹گروه میکروبیولوژی واحد جهرم ، دانشگاه آزاد اسلامی، جهرم ایران

²گروه زیست شناسی، واحد دامغان، دانشکده علوم پایه، دامغان، ایران

³گروه میکروبیولوژی، واحد جهرم، دانشگاه آزاد اسلامی، جهرم، ایران

⁴موسسه تحقیقات وسرم سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش وترویج کشاورزی، کرج، ایران.

چکیده

سابقه و هدف: بیماری طاعون نشخوار کنندگان کوچک یکی از مهم ترین عوامل بیماری زا از نظر اقتصادی در گوسفند و بز است که بوسیله موربیلی ویروس ها ایجاد می شود. پروتین H یکی از پروتین های اصلی ایجاد ایمنی بر علیه PPRV است. هدف از پژوهش حاضر کلون و بیان ژن H این ویروس بوسیله سیستم بیانی باکولو ویروس میباشد.
مواد و روش ها: ژن H با روش RT-PCR و آغازگر های اختصاصی، تکثیر و در پلاسمید pFastBac Dual کلون شد. سپس بکمید نوترکیب واجد ژن فوق در سلول میزبان DH10Bac تولید شد. با ترانسفکت کردن سلول Sf9 با بکمید نوترکیب، میزان بیان و خصوصیات آن با روشهای SDS-PAGE، western blotting و بردفورد بررسی گردید.
یافته ها: ژن H با استفاده از پرایمر های اختصاصی از روی ژنوم ویروس PPR به درستی تکثیر و باند اختصاصی بدست آمد و بعد از انتقال بر روی وکتور pFastBac Dual  و سپس بر روی ژنوم باکولو ویروس، صحت کار با استفاده از PCR و هضم آنزیمی اثبات شد. با ترانسفکت کردن بکمید نوترکیب در سلول های Sf9 و انجام پاساژهای متوالی، با استفاده از SDS-PAGE و وسترن بلات نشان داده شد که پروتین نوترکیب حاصل، کاملا خالص و اختصاصی می باشد. میزان بیان این ژن µg/ml 218 بدست آمد.
نتیجه گیری: با توجه به تولید میزان مناسبی از پروتین نوترکیب H، این پروتین می تواند گزینه مناسبی برای تولید واکسن نوترکیب بر علیه PPRV باشد.
 

کلیدواژه‌ها

طاعون نشخوار کنندگان کوچک؛ سلول Sf9؛ نوترکیب

مراجع