پیوندهای مفید
اخبار و اعلانات
آمار
| تعداد نشریات | 418 |
| تعداد شماره‌ها | 9,997 |
| تعداد مقالات | 83,560 |
| تعداد مشاهده مقاله | 77,801,309 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 54,843,931 |
بررسی تاثیر عناصر ترانسپوزونی بر بهبود بیان پروتئین نوترکیب اریتروپوئتین در سلول‌های تخمدان همستر چینی | ||
| فصلنامه زیست شناسی جانوری | ||
| مقالات آماده انتشار، پذیرفته شده، انتشار آنلاین از تاریخ 15 دی 1402 | ||
| نوع مقاله: مقالات پژوهشی | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.22034/ascij.2023.1998160.1546 | ||
| نویسندگان | ||
| ریحانه لهراسبی1؛ سیده هدی جزایری2؛ عباس دانشی پور1؛ زهرا هلفی نژاد1؛ ربابه محمدی1؛ پریسا جاویدزاده1؛ امیر امیری یکتا* 1 | ||
| 1پژوهشگاه رویان، پژوهشکده زیست شناسی و علوم پزشکی تولید مثل جهاد دانشگاهی،مرکز تحقیقات پزشکی تولید مثل، گروه ژنتیک، تهران، ایران | ||
| 2دانشکده علوم نوین، دانشگاه علوم پزشکی آزاد اسلامی، تهران، ایران | ||
| چکیده | ||
| در صنعت زیست‌داروها و تولید پروتئین‌های نوترکیب به دلیل بازده‌ی پایین درج ژن هدف در ژنوم سلول میزبان و همچنین ادغام در مناطق هتروکروماتین که منجر به سرکوب رونویسی و همچنین ناپایداری بیان توالی مورد نظر می‌گردد، دستیابی به سلول‌های دارای بیان بالا با چالش رو برو است. به منظور غلبه بر این محدودیت‌ها، می‌توان از ترانسپوزون‌ها که عناصر ژنتیکی متحرک بوده و با مکانیسم "Cut and Paste" توانایی برش و درج قطعات هدف در نواحی خاصی از ژنوم را دارا می‌باشند، استفاده کرد. در این پژوهش قصد داریم که تاثیر عنصر ترانسپوزونی PiggyBac را بر میزان بیان پروتئین نوترکیب اریتروپوئتین بررسی کرده و به رده‌ی سلولی دارای بیان بالا دست پیدا کنیم. ابتدا توالی ژن اریتروپوئتین نوترکیب (rEPO) بهینه‌شده بر اساس ارجحیت کدونی سلول CHO در وکتور pOptiVECTM همسانه‌سازی شد. جهت ایجاد دومین وکتور بیانی، قطعه‌ی EPO-IRES-DHFR در پلاسمید PB513B-1 درج و سپس مراحل همسانه‌سازی در هر دو ناقل با استفاده از واکنش Colony PCR، هضم آنزیمی و توالی‌یابی سنگر تایید شد. جهت ایجاد لاین سلولی پایدار، هر دو وکتور به طور مجزا به سلول CHO DG44 ترانسفکت و سپس غربالگری آن‌ها انجام شد . پس از تایید درج وکتورها درون ژنوم سلول هدف، میزان بیان ژن اریتروپوئتین در سطح رونوشت و پروتئین به ترتیب با استفاده از تست‌های qRT-PCR و وسترن بلاتینگ در دو رده‌ی سلولی بررسی شد. نتایج حاصل از آزمایش Real-Time PCR، افزایش 188 برابری میزان رونوشت ژن اریتروپوئتین در لاین سلولی PB513B-1-EPO نسبت به pOptiVEC-EPO را نشان داد. همچنین یافته‌های آزمایش وسترن بلاتینگ، سنتز و ترشح صحیح این پروتئین را تایید کرد. بررسی نتایج حاصل از این پژوهش نشان داد که عنصر ترانسپوزونی به صورت چشمگیری سبب افزایش بیان ژن موردنظر در سطح رونوشت شده و توانایی ایجاد رده‌ی سلولی با بیان بالا از پروتئین هدف را دارا است. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| عنصر ترانسپوزونی؛ رده‌ی سلولی دارای بیان بالا؛ PiggyBac؛ اریتروپوئتین؛ پروتئین نوترکیب دارویی؛ CHO DG44 | ||
| مراجع | ||
|
| ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 118 |
||